細胞培養(yǎng)與支原體污染

支原體對細胞培養(yǎng)會帶來嚴重的危害，同時，它的發(fā)生率較高，肉眼不易察覺。

有報道，在細胞培養(yǎng)室中，它的平均發(fā)生率甚至可高達63%。在生物制品中，它的發(fā)生率為1%~3%。

細胞培養(yǎng)中支原體的來源

細胞培養(yǎng)過程中，污染細胞的支原體主要有5個方面的可能來源：

1. 環(huán)境

2. 被污染的細胞

3. 人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）

4. 實驗試劑，如培養(yǎng)基、胰酶等

5. 未*消毒的實驗器具

其中，環(huán)境是造成支原體污染的一個主要原因。

特別是多人培養(yǎng)細胞時共用同一培養(yǎng)箱、同一操作臺，即使其中一個人很注意，但如果其他實驗者給環(huán)境中帶進支原體，以及培養(yǎng)箱箱門打開頻繁，也會顯著增加細胞中出現支原體污染的風險。因此環(huán)境預防遠比在培養(yǎng)液中加入抗支原體藥物重要。

處理細胞培養(yǎng)工作區(qū)域的支原體

這里的工作區(qū)域包括實驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱（水槽除外）、液氮罐、移液器、門把手等細胞培養(yǎng)的環(huán)境。

使用德國MB公司生產的支原體祛除噴霧或濕巾（品名：Mycoplasma-off™），可在5-10分鐘清除支原體，高效快速，操作方便。

產品特點及原理：

1）快速有效

噴霧劑和濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。

與傳統的化學試劑熏蒸方法相比，更加安全；與傳統酒精處理、紫外線照射方法相比更有效！

2）廣譜抗菌

不僅能祛除支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。

3）無腐蝕性和致癌性

乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分。

4）操作簡便

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

使用方法及步驟：

 

噴霧劑:

注：對于細胞培養(yǎng)箱，內部噴灑支原體祛除噴霧或用濕巾擦拭后，應打開箱門通風至少1小時。如培養(yǎng)箱帶熱滅活功能，可開啟該功能以替代風干。

 

濕巾:

對于移液器，門把手，電子設備等，可使用支原體祛除濕巾。擦拭后，應讓其被消毒物體的表面保持濕潤，再讓其自然風干。

培養(yǎng)箱水槽和水浴鍋中預防支原體污染的方法

細胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋經常會有支原體以及各種細菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時，水槽中的水源即會成為細胞污染的重要來源。

保持水槽的潔凈，對細胞培養(yǎng)的順利進行非常重要。

推薦眾多實驗室日常都在使用德國MB公司生產的Water Shield支原體污染防護劑（水槽用）。Water Shield可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細菌、酵母、霉菌和孢子的污染。

 

產品特點：

1）長效。Water Shield含表面活性劑、季銨鹽和絡合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周。

2）安全。不含醛類或疊氮化物，對細胞無毒害。

3）廣譜。預防支原體、細菌、酵母菌、霉菌和孢子污染。

4）方便。Water Shield按1:200比例，直接加入水中，使用方便。

5）不產生水垢。

操作步驟：

1）Water Shield和蒸餾水可直接加入培養(yǎng)箱水槽或水浴鍋中。

2）Water Shield按1:200比例使用，例如：1000ml蒸餾水+5ml Water Shield，或10L蒸餾水+50ml Water Shield。

3）4周左右清洗水槽，換水，重新加入Water Shield。

 

注意事項：

避免吸入。眼睛接觸或長時間皮膚接觸可能會產生刺激性。因而，使用試劑時應戴上護目鏡和一次性手套。一旦皮膚接觸，應用大量水沖洗。

Water Shield對玻璃、陶瓷、塑料、橡膠、鋼制品、貴金屬和其他金屬安全性良好。